贾斯汀·塞洛克斯1971年生于美国华盛顿特区，父母的职业分别是记者和律师，他也影片《蚊子海岸》的小说原作者保罗·塞洛克斯的侄子。贾斯汀·塞洛克斯毕业于全美著名艺术院校本宁顿大学，拥有视觉艺术和戏剧双学位

1996年处女作《我枪杀了安迪·沃霍尔》之后，塞洛克斯一边活跃在喜剧舞台上，另出演了《阿珠与阿花》、《巴克斯特》和《伤心人俱乐部》等喜剧影片，2000年《美国精神病人》中为初露锋芒的克里斯蒂安·贝尔配戏，2002年的《霹雳娇娃2》则是塞洛克斯的第一部卖座商业大片。此外他还出演过两部热门电视剧的电影版，分别是《有糖果的陌生人》和《迈阿密风云》，大卫·林奇执导的《内陆帝国》、《穆赫兰道》中也能看到他的身影。电视剧方面，早期塞洛克斯出演过警察剧《特区刑警》，后在《双面女间谍》、《欲望都市》以及《六尺风云》等中客串登场。

2006年贾斯汀·塞洛克斯执导了处女作《奉献》，07年通过圣丹斯电影节公开，本届电影节上还有他的两部出演作品《蹩脚英语》和《十》，后者中他出演的不是别人，而是基督耶稣。塞洛克斯出演的最新电影是本·斯蒂勒自导自演的喜剧片《热带惊雷》，他是也本剧的两位编剧之一。

2019年，贾斯汀·塞洛克斯为迪士尼真人版动画电影《小姐与流浪汉》中的“流浪汉”配音。

2011年，贾斯汀·塞洛克斯和詹妮弗·安妮斯顿结识于《漫游》片场，并开始交往。2012年8月10日，贾斯汀·塞洛克斯生日，两人宣布订婚。2015年8月5日，贾斯汀·塞洛克斯44岁生日派对上，两人秘密完婚。

2018年2月16日，贾斯汀·塞洛克斯与詹妮弗·安妮斯顿宣布离婚。